Section 7 : Techniques de base de microbiologie

Préparation des milieux de cultures

Les milieux de culture peuvent être :

  • commercialisés : « prêts à l'emploi », « prêts à couler » ou en poudre (mélange complet des constituants de base) ;

  • préparés en mélangeant les différents composants le constituant (cas des milieux synthétiques).

La préparation nécessite une stérilisation (non exclusive) :

  • par autoclavage (15 à 20 minutes à 120°C)

  • par filtration si certains composants sont thermolabiles.

MéthodeExemple de protocole

  • Évaluer le volume de milieu nécessaire,

  • Mesurer la masse nécessaire de poudre et d'éventuels additifs,

  • Mettre les poudres en suspension dans un volume de diluant inférieur au volume nécessaire,

  • Chauffer pour dissoudre si nécessaire en agitant (à ébullition en général),

  • Ajouter le complément de diluant,

  • Rectifier le pH par addition de NaOH ou HCl à 1 ou 0,1 mol.dm-3 à l'aide d'un pH-mètre, sauf si le fabricant indique le contraire,

  • Conditionner, en prenant garde à la solidification d'un milieu contenant de l'agar et en respectant les contraintes de volumes pour certains milieux.

  • Stériliser, éventuellement à l'autoclave ou par filtration, assez rapidement après la fabrication.

Conditionnement

Les milieux peuvent être conditionnés en :

  • Tubes de faible diamètre et courts ou longs (VF) ;

  • Tubes normaux (18 mL maximum) ;

  • Tubes de grands diamètres ;

  • Flacons (intéressant pour les milieux à couler en boîte) (classiquement au lycée nous utilisons des flacons de 125 mL, contenant : 100 mL de milieu pour couler ≈ 6 géloses) ;

  • Boites de Pétri (conservation limité au réfrigérateur ou en chambre froide, boites retournées pour éviter la condensation sur le couvercle).

Des bouchons à vis étanches sont préférables au coton pour éviter la déshydratation.

Dans certains cas, le volume de milieu doit être respecté scrupuleusement : gélose antibiogramme, tubes de diluants pour dilutions en série ...

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